1、 培养基的新鲜程度：一般加入血清后的完全培养基，最好2周内用完。否则血清有效成分失活，影响细胞培养。
建议：完全培养基一次不要配太多，200ml以下。或根据用量决定。
2、 细胞外源微生物的污染：细胞不宜长期体外培养，因为外源微生物污染的几率大大提高。易发现和难发现的。影响细胞状态。
建议：实验前冻存一批细胞，隔几个月重新复苏。即保证实验所用细胞代数一致，又将外源污染的后果降到最低。
3、 排除其他原因：如更换培养条件（血清、培养基等）；使用器皿的洁净程度；