RAW264.7细胞培养注意事项

发表日期: 2021-01-04    浏览数: 3311

常见问题:

1.该细胞对培养基及血清的质量要求较高,其中任何一个质量不好都会导致后续培养过程中细胞的分化,特别是传34代以后细胞容易出现分化,细胞变大,贴壁较紧,呈典型“摊鸡蛋”样;

2.该细胞在传代或复苏后,刚贴壁时会有短小的突触,但细胞胞体还是呈圆形或近圆形;待细胞培养2-3天后,短小突触会消失;

3.如果用胰酶消化,经验不足时,极易导致后续细胞形态的改变,也不容易将细胞消化下来;

4.如果用细胞刮将细胞刮下来,容易导致大量细胞死亡和细胞形态的改变,也不容易分散为单细胞;

5.该细胞不管在任何密度下,只要是更换了新鲜培养基后紧接着进行吹打,细胞会很难从培养瓶壁上脱落。

推荐的传代方法有以下两种:

方法一:该细胞在细胞密度较大,培养基较黄时,不要去除旧培养基,用移液管直接对培养瓶壁上的细胞进行吹打,使细胞从壁上脱落。细胞脱落后可加入新鲜的完全培养基混匀后分瓶;也可收集培养瓶中的细胞悬液,离心后,,弃上清,再用新鲜的完全培养基重悬细胞后分瓶,进行培养。这种方法容易出现的问题是,如果操作者经验不足,可能导致部分细胞无法脱落。

方法二:细胞密度达到80~90%,需要进行传代时,可在培养瓶中的原培养基中滴加1~2滴无菌的HEPES缓冲液(视培养瓶中培养基的体积适当可以增加HEPES*的用量),作用1~2min,使培养基PH变酸,培养基颜色变黄,直接用移液管进行吹打,这时细胞会很轻易脱落,并成单细胞。细胞脱落后可加入新鲜的完全培养基混匀后分瓶;也可收集培养瓶中的细胞悬液,离心后,弃上清,再用新鲜的完全培养基重悬细胞后分瓶,进行培养。

 

*HEPES4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸